EXPERIMENTO 2

                    PUNTO ISOELECTRICO DE AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS

OBJETIVOS:

•           Determinar los pKa de un aminoácido polar con carga y un aminoácido no polar, mediante titulación con álcali.

•           Estimar el punto isoeléctrico de los aminoácidos polares y no polares del gráfico de pH vs volumen de base.

•            Determinar el punto isoeléctrico de una proteína mediante  la técnica de precipitación.

MARCO TEORICO

El punto isoeléctrico es el pH al que una sustancia anfótera tiene carga neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminoácidos y también en las proteínas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben utilizar los pK_a.

Las moléculas complejas, tales como las proteínas, se combinan con los iones hidrógeno y con otros iones presentes en la disolución, dando lugar a la carga neta de la molécula. A la concentración de iones hidrógeno, o al pH, para el cual la concentración del ion híbrido de una proteína es máxima y el movimiento neto de las moléculas de soluto en un campo eléctrico es prácticamente nulo, se le denomina punto isoeléctrico.

Los aminoácidos pueden existir como sal interna, llamada zwitterión. Esto ocurre porque un electron del oxigeno del grupo carboxilo es atraído por el grupo amino NH₂(ya que a al nitrogeno le sobraban dos electrones de valencia)que está en posición alfa y quedando este como grupo amoníaco NH₃+.

El pI de los a-aminoácidos monoamino-monocarboxílicos, siempre está cercano a pH = 6. Este valor lo podemos calcular con la siguiente ecuación:

 El pI de los á-aminoácidos monoamino-dicarboxílicos se encuentra a un pH intermedio entre los valores de pKa de los grupos carboxílicos y en el caso de los á-aminoácidos diamino-monocarboxílicos entre los valores de pKa de los grupos amino.

Los puntos isoeléctricos proporcionan información útil para razonar sobre el comportamiento de los aminoácidos y proteínas en solución. Así, la presencia de grupos ionizables en éstas moléculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad.

Los aminoácidos y las proteínas son menos solubles en su punto isoeléctrico si las demás condiciones permanecen iguales. Esto se debe a que los iones dipolares no presentan carga neta y cristalizan en forma de sales insolubles a ese pH.

MATERIALES

PIPETAS

SOPORTE

MATRACES

PINZAZ PARA BURETAS

 

BURETA

PONTECIOMETRO

REACTIVOS

Reactivo	Toxicidad
Acido Glutamico	Irritación en la piel Evite el contacto con la piel Cancerígeno No
Glicina	Irritación a los ojos: poco irritante Sensibilización: no presenta Toxicidad crónica: no carcinogénico Teratología: no presenta riesgos Reproducción: no tóxico
Acido Clorhídrico	El ácido clorhídrico y concentraciones altas de gas, son altamente corrosivos a la piel y membranas Mucosas
Hidróxido de Sodio	Inhalación: Corrosivo. Piel: Corrosivo. Enrojecimiento, graves quemaduras cutáneas. Ojos: Corrosivo. Enrojecimiento, dolor, visión borrosa
Etanol al 95%	Ojos: Causa irritación. Ingestión: Grandes cantidades pueden causar náuseas y vómito, dificultad para respirar. Piel: Puede causar irritación Tras absorción: de grandes cantidades causa borrachera, vértigo, narcosis, parálisis respiratoria.
Éter	Efectos por inhalación: No se conocen efectos toxicológicos causados por este producto.

DISEÑO EXPERIMENTAL

PARTE A:

PARTE B: