jueves, 1 de diciembre de 2011

Experimento 4.
Separación y cuantificación de fracciones proteínicas del suero.

Objetivos:
1.                        Aplicar la técnica de precipitación salina selectiva para separar las diferentes fracciones de proteína presentes en una mezcla.
2.                        Determinar el porcentaje de composición de una mezcla de proteína mediante análisis colorimétrico.

Marco Teórico:

El suero es el líquido de color ámbar que se obtiene por centrifugación y o decantación de la sangre que se ha coagulado.  En el proceso de coagulación se separan todas las proteínas de la coagulación (fibrinógeno), conjuntamente con las células plasmáticas. 

La viscosidad del suero de debe en gran parte a la albúmina, que  constituye el 55% de las proteínas totales.  Junto con los electrolitos, la albúmina participa en la regulación del volumen sanguíneo, al evitar que el agua que forma parte de la sangre difunda hacia los espacios intersticiales; también participa en el transporte de ácidos grasos.  Las globulinas comprenden el 38% de las proteínas plasmáticas y corresponden a los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) que liberan las células plasmáticas.  La función anticuerpo representa un crucial mecanismo de defensa contra infecciones virales y bacterianas de los animales y el hombre.  Tres fracciones de globulinas (alfa, beta y gamma) se pueden cuantificar y caracterizar por fraccionamiento con soluciones salinas.


Materiales:



Reactivos:





Suero sanguíneo
El suero sanguíneo o suero hemático es el componente de la sangre resultante tras permitir la coagulación de ésta y eliminar el coagulo resultante. Es equivalente al Plasma sanguíneo, pero sin las proteínas involucradas en la coagulación (fibrinogeno en su mayor parte). El suero es útil en la identificación de algunos analitos en los que no se requiere de la intervención de un anticoagulante, ya que este podría interferir en el resultado alterándolo.








Cloruro de sodio
Inhalación: Irritaciones en el tracto respiratorio superior.
CL50 (inhalación - rata): > 42 g/m3 en una hora de exposición.
Contacto con La Piel: Irritaciones.
Contacto con los Ojos: Irritaciones.
Posibles enrojecimiento y dolor.
Ingestión: Nocivo leve.
Grandes dosis pueden causar náuseas, vómitos, diarrea y agotamiento.
Deshidratación.
Reacción inflamatoria en tracto gastrointestinal.
Posibles convulsiones.



Reactivo de Biuret
En contacto con la piel: irritaciones.
Por contacto ocular: irritaciones.
Por ingestión: Irritaciones en mucosas de la boca, garganta, esófago y tracto intestinal.
No se descartan otras características peligrosas. Observar las precauciones habituales en el manejo de productos químicos.
Solución patrón de albúmina
La albúmina es una proteína que se encuentra en gran proporción en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre y a su vez la más abundante en el ser humano.






Sulfato de sodio
RIESGO DE INHALACION
La evaporación a 20°C es despreciable; sin embargo, se puede alcanzar rápidamente una concentración molesta de partículas en el aire.
EFECTOS DE EXPOSICION DE CORTA DURACION

Celite
No tiene toxicidad



Diseño Experimental

Determinación de las Proteínas Totales:


Determine la lectura en el colorímetro a 540 nm.
 
Separación y Determinación de las fracciones de proteínas:


Centrifugue por 5 min. a 3000 r.p.m


Decante el sobrenadante y adicione en tubos de ensayo las siguientes cantidades: 


  
Determine la lectura en el colorímetro a 540 nm.

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