Experimento 6.
Actividad Enzimática de la Ureasa
Objetivos:
Al finalizar el experimento el estudiante estará en capacidad de:
1. Determinar la actividad enzimática de la Ureasa presente en la harina de soya.
2. Calcular la Km. de la enzima de los datos de actividad enzimática, frente a diferentes concentraciones de sustrato.
Marco Teórico:
Las enzimas son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la energía de activación, propia de las reacciones. Se entiende por energía de activación al valor de la energía que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiación) para que dos moléculas determinadas colisionen y se produzca una reacción química entre ellas.
Características de la acción enzimática:
1- Especificidad de Sustrato: El sustrato es la molécula sobre la que la enzima ejerce su acción catalítica.
2- Especificidad de acción: Cada reacción esta catalizada por una enzima específica.
La acción Enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado de transición.
E + S ES E + PEl sustito se une a la enzima a través de numerosas interacciones débiles como son: puentes de hidrogeno, electrostáticas, hidrófobas, etc., en un lugar especifico, el centro activo. Este centro es una pequeña porción del la enzima constituido por una serie de animoácidos que interaccionan con el sustrato.
La Ureasa es una enzima que convierte la urea en amoniaco a pH neutro y se puede obtener de fuentes vegetales, específicamente de la harina de frijol de soya. Participa en el metabolismo del nitrógeno en plantas. Estas enzimas permiten el estudio de nitrógeno ureico presente en el plasma humano.
En el estudio de la actividad enzimática de la ureasa, se titula el amoníaco formado con ácido clorhídrico valorado y se reporta al actividad enzimática en moles de producto formado por minuto. Se verifican las siguientes reacciones.
Ureasa
(NH2)2CO 2NH3 + CO2 Urea Amoniaco
NH3 + H2O NH4 OH
NH4OH + HCl NH4Cl + H2O. Materiales
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| TUBOS DE ENSAYOS |
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| PIPETAS |
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| VASOS QUÍMICOS |
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| GOTERO |
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| SISTEMA DE TITULACIÓN |
REACTIVOS
Urea 0.25 M | Limite de exposición permitido: no establecido Síntomas y signos de la exposición: Piel: puede causar irritación en contacto prolongado. Ojos: puede causar irritación. Iinhalación: la inhalación repetida y prolongada puede conducir a irritación respiratoria. Ingestión: muy baja toxicidad por ingestión. |
Amortiguador: KH2PO4 | |
Ureasa | |
HCl 0.2 M | |
indicador rojo de fenol | |
indicador azul de timol | |
Cloruro de mercurio |
DISEÑO EXPERIMENTAL
Prepare los siguientes tubos de ensayo:
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